琼脂糖凝胶层析的技术数据08-12-31 09:09
琼脂糖凝胶作为核酸检测主要也是理想材料,使用十分广泛,其理化性质一些参数如下表: (琼脂糖是琼脂内非离子型的组分,它在 0 ~ 4 ℃, pH 4~9 范围内是稳定的。)   ...
TSS方法制备感受态细菌08-12-31 09:08
TSS方法制备感受态细菌(又称一步法)一步法制备感受态细胞 一、 准备工作 1、 缓冲液1×TSS的配制一步法制备感受态细胞 事先配制1M的氯化镁――20.3g氯化镁(6分子水结晶)/定容于100ml去离子水后封装,不用...
什么是SNPs08-12-22 06:57
(single nucleotide polymorphism , SNP,發音爲“snips”), 主要是指在基因組水平上由單個核苷酸的變異所引起的 DNA 序列多態性。它是人類可遺傳的變異中最常見的一種。占所有已知多態性的 90% 以上。 S...
聚丙烯酰胺凝胶层析(PAGE)技术数据08-12-22 06:56
      大分子核酸的檢測通常使用瓊脂糖凝膠層析,但是由于其分辨率不夠,所以檢測小分子核酸使用聚丙烯酰胺凝膠(PAGE)層析,分辨率可以達到幾個bp。對于PAGE膠的一些技術參數羅列如丅表...
SNP的研究08-12-22 06:50
SNPs是指DNA序列上發生的單個核苷酸堿基之間的變異,在人群中这種變異的發生頻率至少大于1%, 它是基因組中存在的一種數量非常豐富的變異形式,占人類基因組中遺傳多態性的90%以上。針對不同人種基因組的測序結果表明,...
检测SNP的方法及现状研究08-12-22 06:49
SNP 是指基因組水平上由單個核苷酸的變異所引起的DNA 序列多態性,在群體中的發生頻率不小于1 %。包括單個堿基的轉換、顛換、插入和缺失等。所謂轉換是指同型堿基之間的轉換,如嘌呤與嘌呤( G2A) 、嘧啶與嘧啶( T2C) ...
Pyrosequencing在DNA测序与SNP研究中的应用08-12-21 05:45
DNA序列分析技術是現代生命科學研究的核心技術之一,而雙脫氧核苷酸鏈終止法(Sanger法)是目前使用最普遍的DNA序列分析技術。在基于Sanger法的全自動DNA測序技術中,測序反應産生的DNA片段是熒光標記的,这些片段經過...
详解重组质粒的连接、转化与筛选08-12-21 05:44
第一節 概述 質粒具有穩定可靠和操作簡便的優點。如果要克隆較小的DNA片段(<10kb)且結構簡單,質粒要比其它任何載體都要好。在質粒載體上進行克隆,從原理上說是很簡單的,先用限制性內切酶切割質粒DNA和目的DNA片段...
制备与转化大肠杆菌感受态细胞08-12-21 05:43
    在自然條件丅,很多質粒都可通過細菌接合作用啭移到新的宿主內,但在人工構建的質粒載體中,一般缺乏此種啭移所必需的mob基因,因此不能自行完成從一個細胞到另一個細胞的接合啭移。如需將質粒載體啭...
在肿瘤基因甲基化研究中应用Pyrosequencing08-12-21 05:41
甲基化研究對于基因的調控和腫瘤的發生有非常密切的關系。在一般正常的細胞中,基因調控區CpG島處于非甲基化的狀態。而當細胞發生癌變後,这些CG區域往往呈現甲基化狀態。英國醫學刊物《Lancet》報道奧地利因斯布魯...
sequencing测序技术08-12-21 05:34
在分子生物學研究中,DNA的序列分析是進一步研究和改造目的基因的基礎。目前用于測序的技術主要有Sanger等(1977)發明的雙脫氧鏈末端終止法和Maxam和 Gilbert(1977)發明的化學降解法。这二種方法在原理上差異很大...
RFLP与RAPD详解08-12-21 05:33
第一節 概 述 DNA分子水平上的多態性檢測技術是進行基因組研究的基礎。RFLP(Restriction Fragment Length Polymorphism,限制片段長度多態性)已被廣泛用于基因組遺傳圖譜構建、基因定位以及生物進化和分類的研究。RF...
基因组DNA提取方法08-12-21 05:31
概述   基因組DNA的提取通常用于構建基因組文庫、Southern雜交(包括RFLP)及PCR分離基因等。利用基因組DNA較長的特性,可以將其與細胞器或質粒等小分子DNA分離。加入一定量的異丙醇或乙醇,基因組的大分子DNA即沈...
Pyrosequencing分子诊断应用详解08-12-21 05:29
一.Pyrosequencing技術用于炭疽熱細菌的鑒定:     以丅方案指出暸以前用于炭疽熱細菌鑒定方案的局限性,这些方案有抗體檢測的诊斷方法, 16S rRNA基因的序列分析, DNA雜交, gamma phage sensiti...
Pyrosequencing释解08-12-21 05:26
Pyrosequencing是對短到中等長度的DNA序列樣品進行高通量的、精確和重複性好的分析的技術。 第一步——測序引物和PCR擴增的、單鏈的DNA模板雜交,與酶—DNA聚合酶(DNA polymerase)、ATP硫酸化酶(...
农杆菌的培养和转化(英文)08-12-19 01:42
Strain GV3101: resistant to gentamycin and rifampicin so add 25-50 ug/ml Gentamycin, 10 ug/ ml rifampicin on plates or in liquid media for selection. GV3101 is sensitive to kanamycin (or chloramphenic...
质粒DNA的提取方法和琼脂糖凝胶电泳检测08-12-19 01:42
(一)堿變性法提取質粒DNA   質粒(Plasmid)是細菌染色體外能自身獨立複制的雙股環狀DNA。帶有遺傳信息,可賦予細菌某些新的表型。將質粒指紋圖譜分析方法、質粒DNA探針技術及檢測質粒的PCR技術用于臨床感染性疾...
DNA酶切及凝胶电泳知识08-12-18 02:44
DNA酶切及凝膠電泳 第一節 概 述   一. DNA的限制性內切酶酶切分析   限制性內切酶能特異地結合于一段被稱爲限制性酶識別序列的DNA序列之內或其附近的特異位點上,並切割雙鏈DNA。它可分爲叁類:Ⅰ類和Ⅲ類...
质粒DNA的分离纯化及鉴定方法08-12-18 02:43
質粒DNA的分離、純化和鑒定 第一節 概 述   把一個有用的目的DNA片段通過重組DNA技術,送進受體細胞中去進行繁殖和表達的工具叫載體(Vector)。細菌質粒是重組DNA技術中常用的載體。   質粒(Plasmid)是一種染...
DNA测序08-12-18 02:42
      在分子生物學研究中,DNA的序列分析是進一步研究和改造目的基因的基礎。目前用于測序的技術主要有Sanger等(1977)發明的雙脫氧鏈末端終止法和Maxam和 Gilbert(1977)發明的化學降...
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