mRNA差别显示技术的试验步骤

时间:12-30 05:32

生物试验方法:

1.总RNA的提取(Northern 杂交)

2.第一链合成:

(1)总RNA样品 2μg;cDNA合成引物 1μl;加ddH2O补至5μl。将管标号为1A,2A,PC A等。PC为阳性对照。

(2)混匀後稍离心。

(3)70℃孵育3min,冰浴2min後稍离心。

(4)准备dNTP mix (以5管为例 )

每管 5管

生物试验方法:

5×第一链缓冲液 2μl 10μl

dNTPmix(各5mM) 2μl 10μl

MMLV逆轉录酶(200u/μl) 1μl 5μl

5μl 25μl

(5)每管加入5μl,混匀後稍离心。

(6)42℃孵育1hr。

生物试验方法:

(7)75℃ 10min终止反应後置冰上,稍离心。

(8)将2μl反应液分別轉至新管中(新管标号为1B,2B,PC B等)。

(9) 将78μl ddH2O分別加入B管中,混匀。

(10)将72μl ddH2O分別加入A管中,混匀。

(11)将所有cDNA稀释液 -20℃保存待用。

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