细胞周期测定方法

时间:02-08 04:24

一、原理

細胞周期指細胞一個世代所經曆的時間。從一次細胞分裂結束到下一次分裂結束爲一個周期。細胞周期反應暸細胞增殖速度。

單個細胞的周期測定可采用縮時攝影的方法,但它不能代表細胞群體的周期,故現多采用其他方法測群體周期。

測定細胞周期的方法很多,有同位素標記法、細胞計數法等,这裏介紹一種利用BrdU滲入測定細胞周期的方法。

BrdU(5-溴脫氧尿嘧啶核苷)加入培養基後,可做爲細胞DNA複制的原料,經過兩個細胞周期後,細胞中兩條單鏈均含BrdU的DNA將占l/2,反映在染色體上應表現爲一條單體浅染。如經曆暸叁個周期,則染色體中約一半爲兩條單體均浅染,另一半爲一深一浅。細胞如果僅經曆暸一個周期,則兩條單體均深染。計分裂相中各期比例,就可算出細胞周期的值。 二、儀器、用品與試劑

1、儀器、用品:同常規細胞培養

2、試劑:BrdU(1.0mg/ml),甲醇、冰醋酸,Giemsa染液,秋水仙素,2×SSC液 叁、操作步驟

1、細胞生長至指數期時,嚮培養液中加入BrdU,使最終濃度爲10μg/ml。

2、44小時加秋水仙素,使每ml中含0.1μg。

3、48小時後常規消化細胞至離心管中,注意培養上清的漂浮細胞也要收集到離心管中。

4、常規染色體制片(見第叁部分:染色體技術)。

5、染色體玻片置56℃水浴鍋蓋上,鋪上2×SSC 液,距紫外燈管6cm處紫外照射30分鍾。

6、棄去2×SSC液,流水沖洗。

7、Giemsa液染色10分鍾,流水沖洗,晾幹。

8、鏡檢100個分裂相,計第一、二、叁、四細胞期分裂指數。

9、計算:

細胞周期(Tc)=48/{(M1 2M2 3M3 4M4)/100}(小時)

附: (1)BrdU配制: BrdU 10mg十雙蒸水10ml 4℃下避光保存。

(2)2×SSC配制: NaCl 1.75克,檸檬酸叁鈉--2H2O 0.88克,加水至100ml,4℃保存。

 

 相关内容

本页文章:细胞实验技术 - 细胞周期测定方法