8种细胞破碎方法

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1、高速組織搗碎 :將材料配成稀糊狀液,放置于筒內約1/3體積,蓋緊筒蓋,將調速器先撥至最慢處,開動開關後,逐步加速至所需速度。此法適用于動物內髒組織、植物肉質種子等。

2、玻璃勻漿器勻漿 :先將剪碎的組織置于管中,再套入研杆來回研磨,上下移動,即可將細胞研碎,此法細胞破碎程度比高速組織搗碎機爲高,適用于量少和動物髒器組織。

3、超聲波處理法 :用一定功率的超聲波處理細胞懸液,使細胞急劇震蕩破裂,此法多適用于微生物材料,用大腸杆菌制備各種酶,常選用50-100毫克菌體/毫升濃度,在1KG至10KG頻率下處理10-15分鍾,此法的缺點是在處理過程會産生大量的熱,應采取相應降溫措施。對超聲波敏感和核酸應慎用。

4、反複凍融法: 將細胞在-20度以下冰凍,室溫融解,反複幾次,由于細胞內冰粒形成和剩余細胞液的鹽濃度增高引起溶脹,使細胞結構破碎。

5、化學處理法: 有些動物細胞,例如腫瘤細胞可采用十二烷基磺酸鈉(SDS)、去氧膽酸鈉等細胞膜破壞,細菌細胞壁較厚,可采用溶菌酶處理效果更好。

無論用哪一種方法破碎組織細胞,都會使細胞內蛋白質或核酸水解酶釋放到溶液中,使大分子生物降解,導致天然物質量的減少,加入二異丙基氟磷酸(DFP)可以抑制或減慢自溶作用;加入碘乙酸可以抑制那些活性中心需要有疏基的蛋白水解酶的活性,加入苯甲磺酰氟化物(PMSF)也能清除蛋白水解酥活力,但不是全部,還可通過選擇pH、溫度或離子強度等,使这些條件都要適合于目的物質的提取。

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