细胞传代培养原理与步骤

时间:02-01 04:50

一、原理

細胞在培養瓶長成致密單層後,已基本上飽和,爲使細胞能繼續生長,同時也將細胞數量擴大,就必須進行傳代(再培養)。

傳代培養也是一種將細胞種保存下去的方法。同時也是利用培養細胞進行各種實驗的必經過程。懸浮型細胞直接分瓶就可以,而貼壁細胞需經消化後才能分瓶。

二、材料和試劑

1、細胞:貼壁細胞株

2、試劑:0.25%胰酶、1640培養基(含10%小牛血清)

3、儀器和器材:倒置顯微鏡,培養箱、培養瓶、吸管、廢液缸等

叁、操作步驟

1、將長滿細胞的培養瓶中原來的培養液棄去。

2、加入0.5--1ml 0.25%胰酶溶液,使瓶底細胞都浸入溶液中。

3、瓶口塞好橡皮塞,放在倒置鏡下觀察細胞。隨著時間的推移,原貼壁的細胞逐漸趨于圓形,在還未漂起時將胰酶棄去,加入10ml培養液終止消化。

觀察消化也可以用肉眼,當見到瓶底發白並出現細針孔空隙時終止消化。一般室溫消化時間約爲1--3分鍾。

4、用吸管將貼壁的細胞吹打成懸液,分到另外兩到叁瓶中,實踐培養液塞好橡皮塞,置37℃下繼續培養。第二天觀察貼壁生長情況。

附:消化液配制方法:

稱取0.25克胰酶蛋白酶(活力爲1:250),加入100ml無Ca2 、Mg2 的Hank’s液溶解,濾器過濾除菌,4℃保存,用前可在37℃下回溫。

胰酶溶液中也可加入EDTA,使最終濃度達0.02%。

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